Varietatea infecțiilor bacteriene necesită o identificare clară a agentului patogen și definirea speciei acestuia. Pentru a determina tipul de microorganism, microbiologii sunt ajutați de proprietățile sale tinctoriale - susceptibilitatea microbilor la colorarea cu diverși coloranți. Această metodă vă permite să explorați morfologia agentului patogen. Proprietățile tinctoriale ale bacteriilor sunt de mare importanță pentru cercetările practice și teoretice din domeniul microbiologiei.
Cercetarea microbiană
În bacteriologie, există multe metode de colorare a microorganismelor. Toate se bazează pe proprietățile tinctoriale ale bacteriilor. Colorarea vă permite să determinați forma, structura, dimensiunea, poziția relativă a acestora. Aceasta permite rezolvarea problemelor de sistematizare a tipurilor de microorganisme de biologie generală și microbiologie comparată.
De ce le pictezi
Bacterii sunt practicorganisme transparente și fără utilizarea colorației, acestea sunt slab vizibile pentru microscopia convențională. Puteți folosi tipuri speciale de microscopie (contrast de fază, câmp întunecat) pentru a studia obiectele, dar cel mai simplu mod este colorarea, după care bacteriile devin vizibile într-un microscop cu lumină convențională.
Pregătirea probei
Indiferent de tehnica de colorare folosită, există reguli uniforme pentru pregătirea obiectului studiat. Următoarele etape sunt obligatorii:
- Instrumentele sterile fac un frotiu pe o lamă de sticlă.
- Proba este în curs de uscare. Acest lucru se face la temperatura camerei sau folosind dulapuri de uscare.
- Urmat de etapa de fixare - microorganismele sunt atașate de sticlă cu compuși speciali.
- Cotare corectă - proba este acoperită cu colorant pentru o perioadă fixă de timp, după care este spălată.
- Uscare finală - proba este uscată din nou.
Cele mai comune coloranți
Cele mai des utilizați coloranți sunt pe bază de anilină cu diferite valori de aciditate (pH). Majoritatea coloranților sunt pulberi care sunt diluate în alcool.
Coloranții în care cationii sunt agenți de colorare se numesc bazici (pH mai mare de 7). Ele pot fi folosite pentru a colora microorganismele în culori roșu (magenta, safranină), violet (violet de metil, tionină), albastru (albastru de metilen), verde (verde malachit), maro (crisoidin) și negru (indulină).
Coloranții, în care agenții de colorare sunt anioni, se numesc acizi (pH mai mic de 7). Acestea vor colora proba în roșu (eozină), galben (picrin) sau negru (nigrosin).
Există un grup de coloranți neutri (de exemplu, rodamina B), în care atât cationii, cât și anionii acționează ca agenți de colorare.
Cultură moartă sau vie
Metodele de colorare sunt împărțite în două grupe în funcție de forma de viață a specimenului de testat.
- Colorare vitală (pe viață). Această metodă de studiere a proprietăților microorganismelor este utilizată în studiul țesuturilor vii, ceea ce face posibilă observarea proceselor vitale ale microbilor. Pentru această colorare se folosesc coloranți cu toxicitate scăzută și putere mare de penetrare.
- Colorare post-vitală. Aceasta este colorarea microorganismelor moarte sau ucise. Datorită proprietăților tinctoriale ale bacteriilor, microbiologii le determină structura. Această colorare este cea mai utilizată.
Gram-pozitive și Gram-negative
Aceste caracteristici ale bacteriilor pot fi găsite în instrucțiunile pentru diferite medicamente. Această metodă de studiere a proprietăților tinctoriale ale bacteriilor se bazează pe utilizarea colorantului violet de gențiană și fixarea iodului. Aceasta este tehnica lui Hans Christian Gram, un medic danez care a propus-o în 1884. Ca urmare a acestei colorări, bacteriile sunt împărțite în două grupe:
- Gram (+) - devine albastru(stafilococi și streptococi).
- Gram (-) - colorează de la roz la roșu (enterobacterii, salmonella, E. coli).
Diferitele rezultate de colorare se datorează proprietăților tinctoriale diferite ale pereților bacterieni. Metoda colorației Gram este încă principala în diagnosticarea unor boli infecțioase.
Alte tehnici de colorare
Să mai caracterizăm câteva metode utilizate pe scară largă în bacteriologie.
- Metoda Ziehl-Nelson - determină rezistența la acid a bacteriilor. Identifică agenții cauzali ai tuberculozei și micobacteriozei.
- Tehnica Romanovsky-Giemsa - colorează cu roșu bacteriile acidofile (acid acetic și acid lactic) și cu albastru bazofile (spirochete și protozoare).
- Tehnica lui Morozov - pătează bacteriile maro și le face vizibile flagelul.
Sporii pot fi văzuți
Cotația cu fuccină a lui Tsiel vă permite să vedeți sporii bacterieni. Avand o culoare roz dupa colorare, ele sunt clar vizibile pe fundalul bacteriilor albastre. Această metodă este, de asemenea, un instrument de bacteriologie și are o mare importanță practică.
