În determinarea diferențială a enterobacteriilor și a unor vibrioni, reacția Voges-Proskauer ocupă un loc aparte. Testul se bazează pe capacitatea bacteriilor de a fermenta glucoza pentru a forma acetoină.
Esența procesului de cercetare
În microbiologie, reacția Voges-Proskauer este adesea folosită pentru a diferenția în familia Yersinia de enterobacterii (inclusiv agenții patogeni ai pseudotuberculozei și enterocolitei), Escherichia coli și aerobii formatori de spori. Rezultatul este vizualizat prin colorarea mediului atunci când se adaugă anumiți reactivi.
Acest test aparține seriei IMViC (abrevierea lui Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - un grup de teste de identificare care includ definiții diferențiale:
- cu indol, bazat pe descompunerea triptofanului în indol, utilizat în prezența unui reactiv Kovacs sau Ehrlich;
- folosindmetilrot sau roșu de metil, care detectează un anumit pH ca urmare a metabolizării glucozei;
- Reacții Voges-Proskauer pentru detectarea acetil-metilcarbinolului;
- utilizarea citratului cu schimbarea culorii ca urmare a alcalinizării mediului.
Esența procesului este vizualizarea prezenței bacteriilor diagnosticate datorită interacțiunii acetoinei formate de acestea cu potasa caustică în prezența oxigenului. Acetil-metilcarbinolul este oxidat la diacetil, care formează un compus roșu sau roz strălucitor. Creșteți sensibilitatea testului introducând alfa-naftol înainte de a adăuga potasiu caustic.
Setare de testare
Formularea reacției Voges-Proskauer implică cultivarea prealabilă a microorganismelor. O cultură pură este însămânțată pe mediul de diagnostic diferențial Clark, a cărei variație este bulionul Clark (fără adăugarea de agar-agar). Se folosește fie mediu gata preparat, fie preparat independent. Ingredientele includ:
- 5g peptonă;
- 5g glucoză;
- 5g fosfat dibazic de potasiu;
- 1L distilat.
În timpul studiului, cultura este inoculată cu o ansă bacteriologică sterilă într-un mediu lichid. Cantitate - 5 ml într-o eprubetă plus control. Incubarea se efectuează la o temperatură de 35-37 de grade timp de două zile. În continuare, se efectuează un studiu al reacției Voges-Proskauer în etape:
- 2, 5 ml de cultură în bulion sunt transferați într-un tub steril.
- Adăugați șase picături de alfa-naftol (soluție de alcool 5%).
- Adăugați 40%o soluție de potasiu caustic în cantitate de 0,1 ml sau două picături.
- Agitarea se efectuează scuturând ușor eprubeta.
- Evaluați rezultatul după 15 minute de la începutul experimentului.
O metodă alternativă de testare este incubarea peste noapte, al cărei timp este redus la 18 ore sau până la o zi. Pe lângă această metodă, se mai folosește și un test expres: se introduce o cultură în buclă în 2 ml de mediu, se incubează aproximativ patru ore, apoi se adaugă reactivi în cantitate egală de 2-3 picături, se amestecă și rezultatul este evaluat după zece minute.
Martorul este unul dintre agenții cauzali ai pneumoniei Klebsiella pneumoniae - tulpină atcc 13883.
Evaluarea rezultatului
După timpul necesar după adăugarea reactivilor (de la 5 la 15 minute), trebuie observată o culoare roșu-vișină cu o reacție pozitivă pronunțată, roșu și roz - cu o reacție slab pozitivă. Nicio modificare nu este înregistrată ca rezultat negativ.
Excesul de potasiu caustic într-o soluție poate da o imitație a unei reacții pozitive, colorarea într-o culoare cupru. În acest caz, răspunsul negativ al coloniei testate trebuie înregistrat. De asemenea, colorarea cu cupru apare in cazurile in care evaluarea se face la o ora dupa introducerea reactivilor.
La evaluarea rezultatului, trebuie luat în considerare faptul că cultivarea prelungită a microorganismelor studiate (mai mult de trei zile) duce la acidificarea mediului, ceea ce poate duce la un rezultat incorect al studiului. Reacția poate fi ușor pozitivă saufals negativ.
Cerințe pentru reactivii de testare
Reactivii Voges-Proskauer trebuie să îndeplinească cerințe precum concentrarea corectă, puritatea ridicată și stabilitatea, care se obțin printr-o depozitare adecvată.
Testurile de testare gata de utilizare conțin de obicei reactivi pentru 100 sau mai multe utilizări și vin în flacoane din plastic sau sticlă colorată. Calitatea este reglementată de documentația relevantă.
